西安第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 710038
树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞（antigen-presenting cells，APC），在免疫反应中起着举足轻重的作用，因此备受重视。20世纪90年代以来，人们在体外诱导扩增DC成功之后，克服了以往由于DC在组织中含量很少、难以获取的困难，使DC研究取得了许多突破性的进展，为人们探索新的疾病防治手段开辟了新的天地。现从树突状细胞的特性、体外诱生及以DC为基础的治疗性疫苗在抗HBV/HCV感染中的作用等3个方面作一综述。
一、DC的特性和功能
树突状细胞最先由Steinman和Cohn在1973年描述。在不同情况下DC形态不同。皮肤及淋巴结中DC是星形的；分离后负载于玻片上的DC有许多树刺状突起；电镜下的DC多呈棘状：相差显微镜下DC的胞体向外延伸成幔状。Steinman［1］阐述了DC与功能相关的几大特性：（1）DC具有捕获加工处理抗原的能力；(2)DC高表达MHCⅡ类产物（＞106／细胞）；(3)DC表达丰富的粘附分于及共刺激因子，如ICAM、LFA3、整合素、B7、CD40和IL12等，这涉及到DC与T细胞的结合及归巢倾向（但这些表面标志随DC的不同分化阶段而有变化）；（4）DC具有显著区别于其它细胞的表面标志。活化的DC不表达T细胞、B细胞和单核／巨噬细胞的典型表面标志，却表达CD83、SI00、CD40、CD80、CD86、CD1a、CD11a、CD45、HLAABC和HLADR、HLADQ［2］等。
DC具有异质性，有人将其分为髓系和淋巴系两大类，但至今仍无非常明确的分类标准。不同的DC担负着不同的使命。胸腺髓质中的DC参与胸腺中的阴性选择，它递呈自身抗原与MHC的复合物给T细胞，然后使能够识别自身抗原并与之有较高亲合力的T细胞克隆失能。髓系DC对T细胞免疫反应可产生强烈的刺激作用，并可分泌IL12，调节T细胞和NK细胞功能，促进Th0朝Th1方向分化，显著影响Th1和Th2的平衡。DC在外周性免疫耐受中也起重要作用。淋巴系DC倾向于促进Th2分化，并可递呈源自凋亡细胞的肽片段。据此，DC可通过递呈来自体细胞的自身抗原给T细胞而诱导对自身蛋白的耐受。迁移中的髓系DC，包括LC，在遭遇外源抗原后产生活性，移向淋巴器官启动免疫反应［1］。
DC对B细胞的生长和免疫球蛋白的分泌有重要作用。两者虽同为APC，但DC有较高MHC及共刺激因子的表达并能大量产生IL12；DC通过Fc及多聚凝集素（multilectin）受体中和抗原，B细胞则有抗原特异性免疫球蛋白受体。原始B细胞仅与间质内非郎罕型DC反应，在DC分泌的IL12作用下产生抗体；DC同时调控着B细胞所产生的免疫球蛋白的种类，IL10与TGFβ诱导IgA1的生成，IgA2的表达则严格依赖于B与DC的直接相互作用，这说明DC控制着粘膜的免疫。滤泡型DC直接维持激活B细胞的活力、生长与分化，生发中心含有CD11c+DC，它可携带免疫复合物，有较强的刺激B细胞的能力。DC与B细胞间作用方式也遵循双信号原则，即DC上的特异性抗原被BCR接受产生第一信号，DC上CR2L与B细胞上CR结合，这对共刺激因子提供第二信号调控体液免疫。
二、DC的体外诱生
体外诱生DC有许多不同的方案。骨髓、脐血和外周血干细胞、外周血单核细胞都可以作为前体来诱导分化为DC，奥地利学者甚至提出乳铁传递蛋白(Lactoferin)阳性的中性粒细胞在体外也可转型为用不同的起始细胞群诱生DC需要不同的培养条件。用CD34-细胞诱生DC时，去掉非贴壁细胞可显著降低淋巴细胞的污染。CD14+单核细胞在合适的条件下也可分化为DC［2］。表1总结了体外诱生培养DC的不同条件。
表1体外诱生培养DC的条件细胞来源
|
培养条件 |
培养基/添加剂骨髓 |
| SCF,GMCSF,TNFα |
IMDM |
| SCF,GMCSF,TNFα |
TMDM/20%FCS脐血 |
| SCF,GMCSF,TNFα,CSF |
RPMI/10%FCS |
| Flt3,IL4,IL13PBSC |
GMCSF,TNFα |
| RPMI/10%FCS |
SCF,GMCSF,IL4 |
| RPMI/10%FCS |
IL3,IL6PBMC |
| GMCSF,IL4 |
RPMI/10%FCS |
| GMCSF,IL4,TNFα |
RPMI/10%FCS |
| GMCSF,IL4,MCM |
RPMI/1% plasma |
尽管用不同的前体细胞扩增DC的方法各不相同，但GMCSF似乎是必不可少的。GMCSF可诱导DC前体扩增，促使其分化，并可在体外维持DC存活达6周。IL4往往与GMCSF同时使用，特别是将外周血单个核细胞或单核细胞作为前体时。IL4可抑制巨噬细胞克隆形成，诱导DC生长和成熟。当用骨髓或脐血CD34+细胞作前体时，则用TNFα代替IL4。TNFα可降低粒细胞的产生，上调细胞GMCSFβ链的表达，增强其对细胞因子信号的反应能力。许多其他细胞因子也被证明对DC的产生具有促进作用如［46］，如IL13,SCF,TGFβ1等。有报道，向用GMCSF、TNFα和IL4刺激的骨髓CD34+细胞培养体系中加入Flt3配体可使DC的收获率提高5倍，再加入SCF可进一步提高。持续的流动灌注培养体系可进一步增强DC的扩增。甲胎蛋白对DC可产生抑制作用，下调共刺激分子的表达：IL10可以抑制OC的分化，将未成熟DC转化为可诱导产生耐受的APC，这也许可成为治疗自身免疫性疾病和过敏性疾病的有效方法。LPS、PGE2、含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(CpG motif containing oligonucleotides,CpGODN)等免疫调节因子可以促进DC成熟从而增强抗原提呈功能。不同的前体细胞，不同的细胞因子和培养条件可以改变DC的表型和功能。GMCSF和IL4有利于髓系DC分化，而IL3促进向淋巴系DC分化，CD40L则对两种DC的成熟都有促进作用［2］。
虽然目前已有的方法可以扩增出一定数量的DC，但不足之处是方法复杂，所需细胞因子的量较大，培养时间长，成本高，所以，DC大量扩增方法学的优化也是下一步研究的关键问题。
三、DC在HBV／HCV发病机制中的作用
近年来，越来越多的证据表明，由DC激活的细胞免疫特别是CTL介导的免疫反应，在机体抵御恶性肿瘤和传染性疾病中发挥着十分重要的作用，而且最近DC疫苗的临床Ⅰ、Ⅱ期试验也取得了令人鼓舞的结果，显示出DC疫苗在恶性肿瘤等疾病中的巨大前景。
(一) DC在HBV发病机制中的作用一般认为，细胞免疫功能低下是HBV感染慢性化的主要原因。作为主要的抗原呈递细胞，DC的功能缺陷将直接影响T细胞的免疫反应。已有实验证实DC可诱导肿瘤细胞免疫耐受，但婴幼期免疫耐受是否与此有关尚需进一步研究。
Akbar等［7，8］使用HBV转基因鼠（HBVTg）模型研究PBMC来源的DC与免疫接种后应答的关系，发现疫苗接种后应答者DC功能明显强于无应答者。在另一些实验中有潜在DC功能的HBVTg经免疫接种治疗后无HBsAg和HBeAg的表达，HBV DNA滴度也较低。DC功能较差者治疗前毫无反应，两组治疗前HBsAg、HBeAg和HBV DNA浓度无差异。提示DC活化程度可作为判断免疫治疗预后的指标。
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