1 山东省威海市文登中心医院 264400; 2 解放军总医院微生物科

关键词 乙肝血清标志物 HBV-DNA

中图分类号:R446.62 文献标识码:B 文章编号:1001-7585(2006)03-0284-02

 

乙肝血清标志物(两对半)的检测是临床诊断乙型肝炎病毒感染及其进程的依据,特别是对急性HBV感染状态的病毒复制期、恢复期的感染,甚至无症状的病毒携带者“窗口期”等,都能通过乙肝五项检测指标反映出来,对临床诊断与治疗有着重要影响。随着PCR技术的发展,其检测在乙肝病毒感染诊断与研究中越来越受到重视,应用也日渐普遍。特别是它的方法灵敏(可达fg水平),又可直接反映HBV的复制状态及传染性,而受到临床医生和病人的重视及信赖。就这种情况笔者对1096例临床标本血清同时做了乙肝血清标志物检测及用聚合酶链反应(PCR)检测了HBV-DNA,现将情况报告如下。

 

1 材料和方法

乙肝血清标志物采用上海科华生物公司出品的“立可读”ELISA试剂检测,按说明书操作,于Athos-II酶联仪阅读结果。HBV-DNA检测,用酚氯仿处理血清,加HBV-DNA试剂在PCR-5113DNA THERAL CYCLER(军事医学科学院生产)进行扩增,用2%琼脂糖在电泳仪上电泳,在254nm紫外灯下观察,出现一条430bp橙色荧光者为阳性。标本为本院门诊和住院疑为肝炎病人的血清。

 

2 结果

依实际测得的乙肝标志物5项的不同类型分为8组,其与PCR结果的对比归纳见表1。

 

3 讨论

从表1可见,第1组单纯HBsAg(+)的8例,HBV-DNA均呈阴性,说明在单项HBsAg阳性的病人中HBV-DNA也一般为阴性,提示这些病人的血清中无HBV复制,当然也不能排除乙肝病毒感染的早期,血清中HBV-DNA含量少,PCR法漏检。

第2组HBsAg(+)、HBeAg(+)的14例中有11例(78.6%)HBV-DNA阳性。第3组HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)的148例中有106例(71.4%)HBV-DNA阳性。从这两组病人结果来看,即使抗-HBc(-),只要血清中的HBsAg(+)、HBeAg(+)病人血清中HBV-DNA阳性率都可达到70%~80%。HBV-DNA的检出受抗-HBc指标影响很小,因为HBsAg和HBeAg通常出现2~10周后,血中的ALT达到高峰时才可检测出抗-HBc^[1],而HBsAg,特别是HBeAg出现,即表示HBV复制,血中即可检测到HBV-DNA。虽然第2组中HBV-DNA检出的阳性率略高于第3组(78.6%>71.4%),但在统计学上无显著差异(P>0.5)。表明前者提示乙肝潜伏期、急性早期与后者提示的乙肝急性期,慢性肝炎活动期差别不大,传染性都很强。从这两组病人结果还可看出,仍有近20%~30%的病人血中未查到HBV-DNA。除表明这些病人的血清中无HBV复制外,更说明在乙肝的诊断上,PCR法检测HBV-DNA不能简单代替乙肝血清标志物的检测,也就是说仅靠PCR法会漏诊20%~30%。

在第4组HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)的348例中HBV-DNA呈阳性的有44例(12.6%)。以前认为抗-HBe(+)预示HBV复制终止,现在一般认为不是乙肝病毒复制终止而是复制水平降低。其原因可能是病毒HBV-DNA整合至宿主肝细胞内而血中游离的HBV-DNA很少,或病毒HBV-DNA变异,使目标扩增片段缺乏而呈阴性^[2]。这组病人不论是乙肝病毒复制终止,还是复制水平降低,传染性都不会很强。

在第5组抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)的160例中HBV-DNA呈阳性的只有4例(2.5%),说明抗-HBs的存在对HBV-DNA的复制有较大抑制作用,但同时也说明HBsAg虽然转阴,出现了抗-HBs,但仍可有HBV-DNA继续复制的可能,仍具有一定的传染性,或者说有一定的潜在传染性。虽然抗-HBs出现,但不能全部阻止HBV-DNA在体内复制。

第6组抗-HBe(+)、抗-HBc(+)的59例中HBV-DNA均呈阴性。这一组实际与第5组属同一类人群,但抗-HBs尚未出现或水平较低,其状态一般为乙肝恢复期,没有乙肝病毒复制,不具有传染性。单一抗-HBs(+)的134例中,HBV-DNA全部阴性。抗HBs是一种中和性抗体,对HBV具有保护性和免疫作用早已被证实,此次调查结果也说明单项抗-HBs(+)的病人,血清不会有HBV-DNA复制,可有效地预防乙肝。笔者调查的这类病人中并非全部是乙肝患者,其中包括一些注射过乙肝疫苗的人。

在225例乙肝标志物全部阴性的血清中,HBV-DNA阳性的有3例(1.2%),这可能是HBV-DNA先于其它血清标志物于血中出现,也可能是在部分HBV感染人群中,血清HBsAg呈低水平存在^[3~5],而采用的ELISA法对这类人群易造成漏检,个别的可能是PCR法的假阳性所致。对于这类病人,定期作复查可以确诊。

综上所述,用PCR检测HBV-DNA用于判断有无HBV复制有较高的敏感性和特异性,与“两对半”的检测结果综合地比较,有助于判断其传染性和观察临床治疗效果。HBsAg(+)、HBeAg(-)的病人有必要做PCR来检测HBV-DNA,了解其复制性以及传染性。而对于只有抗-HBe(+)、抗-HBc(+),或单纯抗-HBs(+)的病人再做HBV-DNA的检测意义不大。PCR技术检测HBV-DNA虽然对其敏感性、特异性很好,但在临床应用上,因价格贵,操作繁杂,尤其是国内目前PCR操作时仅以相应位置有无电泳条带判断阴阳性,而极少再加一步杂交或其特异性鉴定试验,故而更易引起假阳性,这一点应引起大家的足够重视。

 

参考文献

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